梅里埃氧化酶试剂实验操作方法

梅里埃试剂盒：OX氧化酶试剂实验操作方法

1.检验目的
规范氧化酶试验操作

2.实验原理
氧化酶（细胞色素氧化酶）是细胞色素呼吸酶系统的酶。具有氧化酶的细菌，在分子氧的存在下，首先使细胞色素C氧化，再由氧化型细胞色素C使对苯二胺氧化，生成有色的醒类化合物。

3.样本要求
3.1纯的菌落。
3.2细菌要求新鲜。
3.3试剂在空气中容易氧化，故应经常更换新试剂，或配制时试剂内加入0.1%维生素C以减少自身氧化或者放棕色瓶于冰箱。
3.4不宜采用葡萄糖培养基上的菌落（葡萄糖发酵可抑制氧化酶活性）。
3.5实验时应避开含铁的培养基等含铁物质，因本实验过程中，遇铁时会出现假阳性。
3.6氧化酶试验用的菌苔只能在血平板、普通平板等不加指示剂的培养基上挑取切忌在SS、MAC、TCBS上挑取菌落做氧化酶试验。

4.材料：成品氧化酶试剂纸片，试剂成分为盐酸二甲基对苯二胺（或四甲基对苯二胺）0.1g，加蒸馏水10m1，置棕色瓶内可用1周。于2-8℃冰箱保存，或分装于棕色瓶内密封。

5.操作步骤与结果观察
5.1准备清洁白色滤纸条、接种环。
5.2用无菌接种环挑取适量菌苔涂布于滤纸上。
5.3取氧化酶试剂滴加于滤纸上。5.4阳性者菌苔很快出现红色，使用四甲基对苯二胺阳性颜色为蓝色；不变色为阴性。

6.质控
6.1阳性对照：铜绿假单胞菌ATCC27853。
6.2阴性对照：大肠埃希菌ATCC25922。