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丹麦SSI沙门氏菌属诊断血清试剂盒

沙门氏菌抗血清在兔体内培育,包括O和H抗血清。Vi抗体为单克隆抗体,在小鼠腹腔液中生成并提取。根据试验目的,抗血清可单独或联合使用。抗血清供应规格为3 ml瓶装产品(以叠氮化钠作为防腐剂)。已通过吸附排除交叉反应。
当细菌培养物与直接针对细菌表面成分的特异性抗血清混合时,细胞之间将通过抗原-抗体键结合在一起而形成聚集(凝集)。通常裸眼可以观察到在悬液中的团块形成。通过将特异性抗血清与沙门氏菌培养物混合,可以确定O和H抗原。根据观察到的凝集结果并结合Kauffmann-White表1可确定细菌的血清型。

丹麦SSI沙门氏菌属诊断血清试剂盒说明书

步骤
通用
将生理盐水作为阴性对照,并且其检测结果必须为阴性。如阴性对照结果为阳性(凝集),则表明菌株发 生自凝集,即O粗糙型。
OH抗血清的玻片凝集
使沙门氏菌在非选择性琼脂培养基上生长过夜。半固体琼脂培养基是最适用于H分型的培养物生长的培养 基,但如H抗原表达良好,则可以在非选择性琼脂培养基上确定血清型。
1. 将一小滴(约20 μl)抗血清滴在玻片上。
2. 将来自培养基的一些菌落取样转移到抗血清液滴中,然后充分混合。培养物的数量应足以产生明显的 乳白色混浊。取样使用接种环或牙签。
3. 将玻片前后倾斜5 – 10秒。
4. 手持玻片在采用暗背景的光源前(间接照明)用裸眼进行观察,读出反应结果。
5. 阳性反应为可见凝集。阴性反应为保持均一的乳白色混浊。迟发或较弱的凝集应视为阴性结果。 无反应的原因可能是菌株表达Vi抗原(见下文)、所用抗血清未能包含待检菌株的血清型或菌株并非沙门 氏菌。
Vi 抗原的检测
Vi抗原的存在可能干扰或阻止菌株与O抗血清的凝集反应。因此对阴性分离株必须检测Vi抗原。因在Vi原中可能形成变异,所以选择单一菌落是非常重要的,表达Vi抗原的菌落较Vi阴性菌落的不透光性更强。
 
在琼脂平板上的H相诱导(S. Gard方法)2
1. 使半固体琼脂在微波炉或水浴中融化(100 °C),然后冷却至45°C
2. 100 μl用于相诱导(对应于已经确定的相)的H抗血清置于一个小培养皿的中央。
3. 10 ml半固体琼脂倒入抗血清中,最终结果是形成相诱导血清的1:100稀释液。
4. 将平板于室温(22-25°C)下放置10-15分钟,待其凝固。
5. 用接种环从琼脂平板或肉汤培养基中取出一满环新鲜细菌培养物,接种在平板的中央。
6. 35-37°C培养一整夜。
7. 在生长区域边缘取培养物用于玻片凝集。使用Kauffmann-White表选用相关的H抗血清。 H相诱导未成功,则需考虑增加在半固体琼脂平板中的抗血清数量。

 

保存条件与有效期限
避光保存于2-8°C。有效期限见包装。有时在长期保存后可见因脂蛋白沉淀引起的混浊。可采用离心 10,000g)然后过滤灭菌(0.22 μm)的方法即可除去沉淀和/或污染物。
分型支持
如沙门氏菌菌株无法分型,则可送交丹麦哥本哈根市的国家肠道致病菌参考实验室做进一步鉴定,具体地址为:5 Artillerivej, 2300 Copenhagen S, Denmark